PCR是1984年開始出現的一項基因檢測技術，由于PCR技術具有簡便易行、敏感度高等優(yōu)點，該技術被廣泛應用于基礎研究和臨床檢測，成為分子生物學必要的研究工具。傳統的PCR定量是應用終點PCR來對樣品中的模板量進行定量，通常用凝膠電泳分離，并用熒光染色來檢測PCR反應的擴增產物。但在PCR反應中，由于反應體系和反應條件等因素會影響PCR反應效率，甚至出現一些非特異性擴增產物。因此，用終點PCR法來定量并不準確。
熒光定量PCR是1996年推出的一種新的定量技術，該技術克服了PCR法進入平臺期后定量的較大誤差問題，實現DNA/RNA的定量，而且具有敏感度和特異性高、能實現多重反應、自動化程度高、實時和準確等特點，該技術在醫(yī)學臨床檢驗及臨床醫(yī)學研究方面都有著重要的意義。
熒光定量是通過殺滅熒光源，使試劑發(fā)出熒光，從而誘導對應的dna的復制，從而檢測到dna的結構變化，他的熒光源一般是react熒光抗體，目前在熒光定量的實驗中使用react檢測基因序列的變化。可以用來檢測轉錄組、信號通路組、外顯子組的轉錄或翻譯能力的變化等，這些轉錄組數據以及信號通路的數據將決定在熒光實驗方面的分析結果，特別是基因組dna的反轉錄活動，在轉錄組數據分析中具有一定的重要意義。
熒光定量PCR操作的關鍵在于RNA的抽提和引物的設計。RNA的抽提需要嚴格進行RNasefree的操作，抽提的RNAOD260/OD280需嚴格控制在1.9-2.1之間。引物設計主要的考慮是其PCR反應特異性好和擴增效率高，進行PCR反應時無非特異性的條帶和引物聚合體出現，盡量選取GC含量在40-60%的區(qū)段進行擴增。另外，還需要適應熒光定量PCR儀上機條件的設定，退火溫度在55-65°C之間。除此之外，其他各個環(huán)節(jié)如試劑的穩(wěn)定性，RNA反轉的質量好壞，PCR上機條件的設定，加樣的手法和熟練度等等也要注意。
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